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第124期病毒、疫苗纯化的最佳选择——QuikSep Sulfate

2019年10月22日来源:管理员
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在生物技术领域,常使用亲和色谱法进行病毒、蛋白的纯化。亲和色谱法属于吸附色谱法的一种,目标物质有选择地吸附于色谱柱填料的配体上,然后通过更改缓冲液达到分离、回收的目的。使用亲和色谱法回收目标成分,可以比凝胶过滤或离子交换色谱法的精度高出很多。

QuikSep Sulfate是一种特定的亲和填料,适用于部分病毒、病毒样颗粒以及某些特定的抗原和蛋白(见表2)的分离纯化。

特点:

1.?????? 快速、简单(一步纯化)。

2.?????? 载量高。

3.?????? 易于放大。

1:性能参数

介质

QuikSep Sulfate

基质

高刚性琼脂糖

粒径范围

45-165μm

平均粒径

90μm

溶菌酶载量

≥3mg/ml 介质

pH稳定性

5-12(长期) 5-12(短期)

操作压力

≤0.3MPa

流速

16mm× 300mm,0.1MPa300cm/h

贮存溶液

20%乙醇

贮存温度

4-30

?

2QuikSep Sulfate适用性

Viruses

Viral/Microbial Agents

Rabies

Influenza ?

Japanese ? Enchephalitis

Feline ? Leukemia

Feline ? Herpes

Feline ? Calicivirus

Respiratory ? Syncytial Virus

Human ? Herpes Simplex

Human ? Measles

Human ? Parainfluenza

Herpes ? Simplex gA and gB Glycoprotein Subunits

Hepatitis ? B Surface Antigen

Filamentous ? Hemagglutinin from B. pertussis

Leucocytosis ? Promoting Factor Hemagglutinin

?

?

QuikSep Sulfate纯化狂犬病毒层析工艺

?

1. 层析柱

介质:QuikSep Sulfate; 规格:1ml 预装柱

?

2. 样品预处理

高倍浓缩后的样品用平衡液稀释 20 倍,上样前 0.45um 过滤,0.45um 过滤。

?

3. 缓冲液

A10mM PB,pH 7.2; B10mM PB,1M NaCl,pH 7.2。

备注:所有溶液需 0.45um 过滤。

?

4. 纯化过程

流速:1ml/min 或者 30cm/h;

平衡:溶液 A 平衡 10CVCV 指柱体积,下同);

上样:上样 30CV;

清洗:溶液 A 平衡 10CV;

洗脱:溶液 B 洗脱 10CV,收集洗脱液。

?

5. 纯化图谱

? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?QQ截图20191022082740.jpg


5. 检测结果


体积

ml

蛋白浓度

ug/ml

抗原含量

IU/ml

蛋白去除率

%

收率

%

浓缩倍数

纯化倍数

原液

30

615

1.51

94

75.4

11

13

流穿液

30

557

0.22

洗脱液

2

531

17.08

?

7. 结论

该悬浮培养狂犬病毒纯化工艺中,病毒与 QuikSep Sulfate进行吸附结合,洗脱液中蛋白去除率≈94%,回收率≈75.4% 。

8. 订购信息

产品

规格(ml)

货号

QuikSep Sulfate

25

HZ1010-1

QuikSep Sulfate

100

HZ1010-1

QuikSep Sulfate

500

HZ1010-1

QuikSep Sulfate

1000

HZ1010-1


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